serum reponse factor /SRF Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423154-ACT

Mouse Srf codifica il serum response factor (SRF), un fattore di trascrizione della famiglia MADS-box che si lega agli elementi di risposta al siero e coordina programmi di espressione genica dipendenti dallo stimolo. SRF integra le dinamiche RhoA–actina e la segnalazione MAPK/ERK tramite partnership con cofattori come MRTF e TCF, regolando l’induzione dei geni immediate-early, il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione cellulare, la migrazione e la differenziazione miogenica e neuronale. Controllando reti trascrizionali che definiscono l’identità cellulare e la funzione contrattile, SRF è ampiamente studiato in ambiti quali la biologia del muscolo cardiaco e liscio, l’angiogenesi e la plasticità sinaptica. Un’attività di SRF deregolata è stata associata a rimodellamento patologico e a programmi proliferativi alterati, rilevanti per la ricerca cardiovascolare e sul neurosviluppo.

serum reponse factor /SRF Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Srf senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

serum reponse factor /SRF Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Srf nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Srf, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di serum reponse factor /SRF. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Srf nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da serum reponse factor /SRF nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via serum reponse factor /SRF nelle cellule tumorali con espressione di Srf silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.