Serpinb3a Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422808-ACT

Il gene murino **Serpinb3a** codifica un inibitore delle proteasi seriniche di clade B (serpina) coinvolto nella regolazione dell’attività proteasica intracellulare, nelle risposte allo stress cellulare e nell’omeostasi dell’epitelio. In quanto serpin intracellulare, Serpinb3a può influenzare processi dipendenti dalle proteasi legati a infiammazione, rimodellamento tissutale e integrità della barriera, intersecando vie che modulano apoptosi, adattamento allo stress ossidativo e segnalazione immunitaria. Un’espressione alterata dei membri della famiglia delle serpine è stata associata a microambienti infiammatori deregolati e a fenotipi di danno epiteliale, rendendo Serpinb3a un utile nodo molecolare per studiare programmi di stress e proteostasi dipendenti dal contesto. Nei modelli murini, le dinamiche di espressione di Serpinb3a vengono spesso valutate in studi su danno tissutale, rimodellamento fibrotico e patologie immuno-mediate, in cui l’equilibrio proteasi–antiproteasi è un determinante chiave degli esiti cellulari.

Serpinb3a Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Serpinb3a senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Serpinb3a Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Serpinb3a nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Serpinb3a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Serpinb3a. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Serpinb3a nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Serpinb3a nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Serpinb3a nelle cellule tumorali con espressione di Serpinb3a silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.