Serglycin Plasmide Double Nickase (m): sc-422394-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Serglycin Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Serglycin Double Nickase Plasmid (m) e il Serglycin Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Srgn. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Serglycin Antibody (C-11): sc-374657
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Serglycin Plasmide Double Nickase (m) | sc-422394-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene Srgn del topo codifica la serglicina, un proteoglicano secreto e associato ai granuli che porta catene di solfato di condroitina per impacchettare e stabilizzare mediatori cationici come proteasi, chemochine e peptidi antimicrobici. La serglicina contribuisce all’esocitosi regolata e al rimodellamento della matrice extracellulare, influenzando la degranulazione delle cellule immunitarie, la segnalazione infiammatoria e la comunicazione cellula–cellula. Nelle linee ematopoietiche e mieloidi, supporta la biogenesi dei granuli e l’accumulo di molecole effettrici che modellano le risposte immunitarie innate e adattative. Alterazioni dell’espressione della serglicina o della composizione dei glicosaminoglicani sono state collegate a infiammazione deregolata e a processi del microambiente associato ai tumori, rendendo Srgn un nodo utile per studi meccanicistici sulla modulazione immunitaria e su vie dipendenti dalle proteasi.
Serglycin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Srgn nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Srgn. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Srgn. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Srgn interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.