Septin 5 Plasmide Double Nickase (h): sc-402514-NIC

SEPT5 umano codifica la septina 5, una proteina citoscheletrica legante GTP che si assembla in filamenti di septine etero-oligomerici e contribuisce all’organizzazione delle membrane, al traffico vescicolare e al controllo spaziale della dinamica di actina e microtubuli. La septina 5 è arricchita in contesti neuronali e secretori ed è stata associata all’esocitosi e all’ancoraggio (docking) delle vescicole sinaptiche tramite interazioni con la macchina molecolare associata agli SNARE. Impalcature (scaffold) di septine dipendenti da SEPT5 influenzano la polarità cellulare, la citocinesi e la compartimentalizzazione a livello della membrana plasmatica, processi che modellano il trasporto intracellulare e la propagazione dei segnali. Un’espressione alterata di SEPT5 o la perturbazione del suo locus sono state riportate in contesti di ricerca neuroevolutiva e neuropsichiatrica, nonché in dataset di espressione associati al cancro, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico in studi sul rimodellamento del citoscheletro e sulla secrezione.

Septin 5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SEPT5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SEPT5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SEPT5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SEPT5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.