Septin 2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421849

Panoramica

Il gene murino Sept2 codifica la septina 2, una proteina citoscheletrica centrale che lega il GTP e che si assembla in filamenti di septine etero-oligomerici e in strutture ad anello per organizzare l’architettura cellulare. La septina 2 coordina la citocinesi, il rimodellamento di membrana e il traffico vescicolare, e interagisce con le reti di actina e microtubuli per sostenere la crescita polarizzata e la compartimentalizzazione intracellulare. L’impalcatura (scaffolding) dipendente da Sept2 contribuisce a processi quali la formazione del midbody, l’estensione dei neuriti e l’organizzazione della barriera epiteliale, collegando la dinamica delle septine alle vie che regolano divisione cellulare e morfogenesi. Una organizzazione delle septine deregolata è stata associata a mitosi aberranti e a segnali citoscheletrici alterati, rendendo Sept2 un nodo utile per studiare meccanismi rilevanti per la biologia tumorale e fenotipi neuro-sviluppativi in modelli sperimentali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Septin 2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sept2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sept2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sept2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Septin 2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sept2 per lo studio della segnalazione di Septin 2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sept2 critici per la funzione di Septin 2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sept2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Septin 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Septin 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sept2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Septin 2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Septin 2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sept2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sept2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.