SEC22B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402384-ACT

SEC22B (Sec22 omologo B) codifica una proteina v-SNARE che si localizza all’interfaccia tra reticolo endoplasmatico (RE) e Golgi e supporta l’aggancio delle vescicole e la fusione di membrana nelle fasi iniziali della via secretoria. Appaiandosi con complessi t-SNARE, SEC22B contribuisce al traffico anterogrado e retrogrado, mantenendo la maturazione delle proteine, l’omeostasi degli organelli e il flusso del carico secretorio. SEC22B è stato inoltre implicato nella cross-presentazione dell’antigene e nel traffico dal fagosoma al citosol nelle cellule immunitarie, collegando il trasporto vescicolare alla segnalazione immunitaria adattativa. La disregolazione dei programmi di traffico di membrana che coinvolgono SEC22B può influenzare le risposte allo stress del RE e le reti di proteostasi, frequentemente alterate in cancro, neurodegenerazione e fenotipi infiammatori.

SEC22B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SEC22B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SEC22B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SEC22B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SEC22B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SEC22B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SEC22B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SEC22B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SEC22B nelle cellule tumorali con espressione di SEC22B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.