Sc1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420099

Panoramica

Sparcl1 del topo codifica Sc1, una glicoproteina matricellulare secreta della famiglia SPARC che modula l’organizzazione della matrice extracellulare (ECM) e l’adesione cellula–matrice. Sc1 contribuisce alla regolazione della migrazione, della proliferazione e della differenziazione cellulari influenzando la segnalazione mediata dalle integrine, la dinamica delle adesioni focali e i programmi di rimodellamento tissutale. In contesti vascolari e stromali, SPARCL1 è associata alla regolazione dell’angiogenesi e alle interazioni endotelio–muscolo liscio, con variazioni di espressione riportate in fibrosi, rimodellamento associato all’infiammazione e biologia del microambiente tumorale. Queste proprietà rendono Sparcl1 un bersaglio utile per studiare le reti di segnalazione dipendenti dall’ECM che plasmano l’architettura tissutale e fenotipi stromali rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Sc1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sparcl1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sparcl1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sparcl1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Sc1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sparcl1 per lo studio della segnalazione di Sc1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sparcl1 critici per la funzione di Sc1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sparcl1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Sc1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Sc1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sparcl1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Sc1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Sc1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sparcl1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sparcl1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.