Sarcospan Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421332

Panoramica

Sspn codifica la sarcospan, una proteina di membrana tetraspan che fa parte del complesso distrofina–glicoproteine e contribuisce all’organizzazione del sarcolemma stabilizzando gli assemblaggi recettoriali che legano la laminina. Nel muscolo scheletrico e cardiaco, la sarcospan sostiene l’integrità della membrana durante la contrazione e contribuisce alla meccanotrasduzione influenzando la distribuzione e la funzione delle sarcoglicane e delle integrine associate. Un’alterata assemblaggio del complesso dipendente da sarcospan è stato collegato a fragilità muscolare e a una rigenerazione compromessa, rendendo Sspn un punto di partenza utile per studiare vie rilevanti per i fenotipi delle distrofie muscolari. Poiché la sarcospan influisce anche sulle interazioni con la matrice extracellulare e sull’organizzazione dei microdomini di membrana, viene spesso analizzata in modelli di danno delle miofibre, infiammazione e rimodellamento.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Sarcospan (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sspn in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sspn insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sspn a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Sarcospan.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sspn per lo studio della segnalazione di Sarcospan, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sspn critici per la funzione di Sarcospan
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sspn per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Sarcospan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Sarcospan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sspn. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Sarcospan Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Sarcospan (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sspn per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sspn definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.