SAPK4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400423-ACT

MAPK13 codifica la protein-chinasi 4 attivata dallo stress (SAPK4/p38δ), un membro della famiglia p38 MAPK che integra citochine infiammatorie, stress ossidativo e segnali ambientali in risposte trascrizionali e post-traduzionali dipendenti dal contesto. SAPK4 partecipa a reti di segnalazione MAPK che regolano la differenziazione cellulare, l’apoptosi, la dinamica del citoscheletro e i programmi effettrici dell’immunità innata attraverso la fosforilazione di substrati a valle e la modulazione dell’attività dei fattori di trascrizione. Una deregolazione della segnalazione di MAPK13 è stata riportata in molteplici contesti rilevanti per la malattia, inclusi disturbi infiammatori e fenotipi oncogenici, nei quali l’attività di p38δ può influenzare la biologia epiteliale e le interazioni immuno–stromali. In quanto nodo all’interno delle vie di risposta allo stress, SAPK4 viene spesso studiata per analizzare il crosstalk di segnalazione specifico dello stimolo e i programmi di espressione genica a valle.

SAPK4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAPK13 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SAPK4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAPK13 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAPK13, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SAPK4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAPK13 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SAPK4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SAPK4 nelle cellule tumorali con espressione di MAPK13 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.