Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Sam50 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404298
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Sam50 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Sam50, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Sam50 Antibody (SQ-7): sc-100493
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Sam50 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-404298 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
SAMM50 codifica Sam50, un componente centrale del complesso SAM (Sorting and Assembly Machinery) nella membrana esterna mitocondriale, che promuove l’inserzione e l’assemblaggio delle proteine a β-barile e sostiene l’organizzazione delle creste tramite interazioni con la rete MICOS. Mantenendo l’architettura della membrana mitocondriale e la proteostasi, Sam50 influenza la capacità di fosforilazione ossidativa, la dinamica mitocondriale e la segnalazione di risposta allo stress legata al metabolismo energetico. L’alterazione di SAMM50 è associata a fenotipi di disfunzione mitocondriale ed è stata collegata in letteratura a tratti metabolici e a stress cellulare correlato alla neurodegenerazione, rendendola rilevante per studi meccanicistici sul controllo qualità degli organelli. SAMM50 viene inoltre utilizzato come nodo per indagare come i difetti nella biogenesi delle proteine della membrana esterna influenzino la suscettibilità all’apoptosi e la segnalazione dell’immunità innata indotta da perturbazioni mitocondriali.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Sam50 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SAMM50 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SAMM50 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SAMM50 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Sam50.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SAMM50 per lo studio della segnalazione di Sam50, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni SAMM50 critici per la funzione di Sam50
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SAMM50 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Sam50 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Sam50 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SAMM50. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Sam50 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Sam50 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SAMM50 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SAMM50 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.