Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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RUNX3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419487
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RUNX3 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico RUNX3, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RUNX3 Antibody (A-3): sc-376591
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RUNX3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-419487 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Runx3 codifica il fattore di trascrizione RUNX3, una proteina legante il DNA con dominio Runt che interagisce con CBFB per regolare la specificazione di linea e i programmi di differenziamento in molteplici tessuti. Nei sistemi immunitario ed epiteliale del topo, RUNX3 integra segnali provenienti da vie come TGF-β/SMAD e da reti trascrizionali dello sviluppo per controllare le decisioni sul destino cellulare, la maturazione e la regolazione della crescita dipendente dal contesto. Un’alterazione dell’attività di Runx3 è stata associata a programmi trascrizionali deregolati rilevanti per infiammazione, tumorigenesi e fenotipi neuroevolutivi in organismi modello. In quanto nodo nella regolazione di promotori ed enhancer, RUNX3 è spesso studiato per il suo impatto sull’espressione genica dipendente dalla cromatina e sul rimodellamento delle vie a valle.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RUNX3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Runx3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Runx3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Runx3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RUNX3.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Runx3 per lo studio della segnalazione di RUNX3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Runx3 critici per la funzione di RUNX3
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Runx3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal RUNX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RUNX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Runx3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal RUNX3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RUNX3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Runx3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Runx3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.