RUNX2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400183-ACT

RUNX2 codifica un fattore di trascrizione correlato a Runt che agisce come regolatore maestro dell’impegno di linea degli osteoblasti e dello sviluppo scheletrico, coordinando programmi trascrizionali che controllano la produzione della matrice extracellulare, la mineralizzazione e la progressione del ciclo cellulare. Integra segnali provenienti dalle vie BMP/TGF-β, Wnt/β-catenina, Hedgehog e MAPK per regolare geni a valle coinvolti nella formazione e nel rimodellamento dell’osso. Un’espressione o un’attività aberrante di RUNX2 è collegata a disturbi dello sviluppo di osso e cartilagine ed è stata associata a stati di differenziamento alterati e a fenotipi invasivi in diversi contesti oncologici. In quanto fattore che definisce la linea cellulare, RUNX2 è ampiamente utilizzato per interrogare le reti trascrizionali che governano la differenziazione mesenchimale e il rimodellamento del microambiente.

RUNX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RUNX2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RUNX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RUNX2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RUNX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RUNX2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RUNX2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RUNX2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RUNX2 nelle cellule tumorali con espressione di RUNX2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.