RoXaN Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422830

Panoramica

Zc3h7b codifica RoXaN, una proteina contenente dita di zinco implicata nel metabolismo dell’RNA e nella regolazione post-trascrizionale, con ruoli riportati nel coordinare complessi ribonucleoproteici che influenzano la stabilità e la traduzione dell’mRNA. Attraverso queste attività, RoXaN può modulare programmi cellulari legati a proliferazione, risposte allo stress e differenziamento, plasmando a livello di trascritto l’espressione dei componenti delle vie di segnalazione. Un’alterata regolazione dei fattori leganti l’RNA e delle proteine con dita di zinco è spesso associata a un controllo della crescita deregolato e a fenotipi immunitari o del neurosviluppo, rendendo Zc3h7b un locus utile per studi meccanicistici sul controllo dell’espressione genica. Nei sistemi murini, la perturbazione di Zc3h7b consente di indagare come le reti di regolazione dell’RNA intersechino la segnalazione e le transizioni di stato cellulare in contesti rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RoXaN (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Zc3h7b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Zc3h7b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Zc3h7b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RoXaN.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Zc3h7b per lo studio della segnalazione di RoXaN, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Zc3h7b critici per la funzione di RoXaN
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Zc3h7b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RoXaN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RoXaN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Zc3h7b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RoXaN Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RoXaN (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Zc3h7b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Zc3h7b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.