ROS-GC1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404483-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ROS-GC1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ROS-GC1 Double Nickase Plasmid (h) e il ROS-GC1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GUCY2D. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ROS-GC1 Antibody (B-7): sc-376217
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ROS-GC1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404483-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ROS-GC1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404483-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **GUCY2D** codifica la guanilato ciclasi 1 del segmento esterno dei fotorecettori (ROS-GC1), un enzima associato alla membrana che converte il GTP in cGMP per mantenere la segnalazione mediata da nucleotidi ciclici nelle cellule fotorecettrici. ROS-GC1 agisce a valle della fototrasduzione, integrando un feedback dipendente dal Ca²⁺ tramite le proteine attivanti la guanilato ciclasi per ripristinare i livelli di cGMP e regolare l’attività dei canali regolati da cGMP. Questo circuito sostiene l’omeostasi del segmento esterno e la segnalazione sinaptica, accoppiando le variazioni di Ca²⁺ intracellulare indotte dalla luce al turnover dei nucleotidi ciclici. Alterazioni genetiche di **GUCY2D** sono fortemente associate a fenotipi di degenerazione retinica ereditaria, rendendo questo gene un nodo chiave per lo studio del metabolismo del cGMP, della fedeltà della segnalazione sensoriale e dei meccanismi di sopravvivenza dei fotorecettori.
ROS-GC1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GUCY2D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GUCY2D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GUCY2D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GUCY2D interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.