Plásmido CRISPR de Activación (h) Rock-2: sc-400468-ACT

ROCK2 (quinasa de proteínas 2 que contiene un dominio coiled-coil asociada a Rho) codifica Rock-2, una quinasa de serina/treonina que actúa como efector principal de RhoA en la regulación de la contractilidad actina–miosina. Rock-2 fosforila sustratos como la cadena ligera de miosina y las quinasas LIM para controlar la formación de fibras de estrés, la dinámica de las adhesiones focales, la polaridad celular y la citocinesis, modelando así la migración celular y la arquitectura tisular. A través de estos efectos sobre el citoesqueleto, ROCK2 integra señales de vías vinculadas a la mecanotransducción, la remodelación de la matriz extracelular y el tono endotelial y del músculo liso. La desregulación de la señalización de ROCK2 se ha asociado con cambios en el comportamiento invasivo, disfunción vascular, respuestas inflamatorias y procesos relacionados con la fibrosis, lo que la convierte en un nodo ampliamente utilizado para analizar fenotipos de enfermedad impulsados por el citoesqueleto.

Rock-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ROCK2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rock-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ROCK2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ROCK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rock-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ROCK2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rock-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rock-2 en células tumorales con expresión de ROCK2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.