RNF122 Plasmide Double Nickase (h): sc-410134-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNF122 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNF122 Double Nickase Plasmid (h) e il RNF122 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RNF122. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNF122 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410134-NIC | 20 µg | $410.00 |
RNF122 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina con dominio RING finger che promuove il turnover proteico dipendente dall’ubiquitina e contribuisce alla proteostasi regolando la stabilità dei substrati. Nell’ambito del sistema ubiquitina–proteasoma, RNF122 è in grado di influenzare gli esiti di segnalazione controllando l’abbondanza dei componenti delle vie coinvolte nelle risposte allo stress e nella regolazione dello stato cellulare. Alterazioni dell’attività delle ligasi E3 e della dinamica di ubiquitinazione sono ampiamente associate a crescita cellulare disregolata, segnalazione infiammatoria e processi rilevanti per la neurobiologia, rendendo RNF122 un nodo utile per studi meccanicistici. Investigare la funzione di RNF122 può aiutare a chiarire come la regolazione mediata dall’ubiquitina plasmi i programmi trascrizionali e metabolici a valle nelle cellule umane.
RNF122 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNF122 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNF122. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNF122. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNF122 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.