RLF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406295

Panoramica

RGL2 (Ral guanine nucleotide dissociation stimulator-like 2) codifica un fattore di scambio di nucleotidi della guanina (GEF) della famiglia Ras che contribuisce ad attivare le piccole GTPasi RalA/RalB a valle della segnalazione di Ras. Attraverso la modulazione del ciclo delle GTPasi Ral, RGL2 influenza gli output di segnalazione collegati a MAPK e PI3K che regolano il rimodellamento del citoscheletro, il traffico vescicolare, la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress. Un’attività alterata all’interno della segnalazione Ras–Ral è stata implicata nella trasformazione oncogenica e nell’invasione delle cellule tumorali in molteplici contesti tissutali, rendendo RGL2 un nodo utile per studi meccanicistici sull’architettura delle vie di segnalazione. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di RGL2 consente di indagare come la selezione degli effettori di Ras plasmi fenotipi proliferativi e migratori e come si intersechi con la segnalazione dei recettori tirosin-chinasici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RLF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RGL2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RGL2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RGL2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RLF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RGL2 per lo studio della segnalazione di RLF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RGL2 critici per la funzione di RLF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RGL2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RLF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RLF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RGL2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RLF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RLF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RGL2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RGL2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.