RINT-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407428

Panoramica

RINT1 codifica RINT-1, una proteina a coiled-coil che contribuisce all’omeostasi dell’apparato di Golgi e del reticolo endoplasmatico (RE) supportando l’ancoraggio delle vescicole e il traffico di membrane tra questi compartimenti. RINT-1 è implicata nel mantenimento della corretta organizzazione della via secretoria e nel coordinamento delle risposte cellulari allo stress proteotossico e allo stress associato alla replicazione, processi che si intersecano con la stabilità del genoma e il controllo del ciclo cellulare. L’alterazione del traffico dipendente da RINT1 può perturbare la maturazione delle proteine e l’integrità degli organelli, con conseguenti cambiamenti nella segnalazione e nell’adattamento allo stress. Studi genetici e funzionali hanno collegato RINT1 alla suscettibilità al cancro e ad altri disturbi proliferativi, rendendolo rilevante per indagare i meccanismi che collegano il trasporto intracellulare alle risposte allo stress oncogenico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RINT-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RINT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RINT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RINT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RINT-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RINT1 per lo studio della segnalazione di RINT-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RINT1 critici per la funzione di RINT-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RINT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RINT-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RINT-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RINT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RINT-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RINT-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RINT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RINT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.