Plásmido CRISPR de Activación (h) RIN1: sc-402551-ACT

RIN1 (interactor 1 de Ras y Rab) es un efector de Ras y un factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) para Rab5 que coordina la transducción de señales con el tráfico endocítico. Al vincular el RAS activado con la dinámica de endosomas tempranos dependiente de Rab5, RIN1 influye en la internalización de receptores, en la magnitud de la señalización MAPK aguas abajo y en procesos de remodelación del citoesqueleto que dan forma a la migración y la adhesión celular. RIN1 también interactúa con quinasas de la familia ABL y con redes de adaptadores, lo que la sitúa dentro de vías que regulan el tráfico de membranas y respuestas dependientes de actina. La desregulación de la expresión de RIN1 o de su contexto de señalización se ha asociado con cambios en el recambio de receptores de factores de crecimiento y con comportamientos de señalización oncogénica, por lo que es relevante para estudios mecanísticos en biología del cáncer y señalización celular.

RIN1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RIN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RIN1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RIN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RIN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RIN1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RIN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RIN1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RIN1 en células tumorales con expresión de RIN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.