RIM-BP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406740

Panoramica

RIMBP2 codifica RIM-BP2, una proteina di impalcatura della zona attiva presinaptica che, tramite interazioni con le proteine RIM e altri componenti sinaptici, accoppia i canali del Ca2+ voltaggio-dipendenti alla macchina di rilascio dei neurotrasmettitori. Organizzando l’ingresso di Ca2+ in coordinamento con l’attracco e il priming delle vescicole sinaptiche, RIM-BP2 sostiene un’esocitosi efficiente evocata dal potenziale d’azione e la plasticità sinaptica a breve termine nelle sinapsi eccitatorie. Questa proteina partecipa alla segnalazione Ca2+-dipendente nel terminale presinaptico e influenza la dinamica del ciclo delle vescicole, che contribuisce a modellare la forza sinaptica. Alterazioni genetiche di RIMBP2 sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, rendendolo rilevante per lo studio dei difetti della trasmissione sinaptica e delle disfunzioni a livello di circuito.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RIM-BP2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RIMBP2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RIMBP2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RIMBP2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RIM-BP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RIMBP2 per lo studio della segnalazione di RIM-BP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RIMBP2 critici per la funzione di RIM-BP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RIMBP2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RIM-BP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RIM-BP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RIMBP2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RIM-BP2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RIM-BP2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RIMBP2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RIMBP2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.