Ribosomal Protein L22 Plasmide Double Nickase (h): sc-417644-NIC

RPL22 codifica la proteina ribosomiale umana L22, un componente strutturale della grande subunità ribosomiale 60S che contribuisce a coordinare l’architettura dell’rRNA e a sostenere una traduzione efficiente. Oltre al suo ruolo centrale nella biogenesi dei ribosomi e nella sintesi proteica, RPL22 è stata collegata alla regolazione dei processi di maturazione dell’mRNA e alle risposte allo stress cellulare che si intrecciano con i programmi di proliferazione e differenziamento. Alterazioni nel dosaggio o nella funzione delle proteine ribosomiali possono compromettere il controllo della traduzione e l’omeostasi nucleolare, processi spesso studiati nel contesto della biologia del cancro e delle ribosomopatie. Per questo RPL22 è comunemente oggetto di studio per il suo contributo alla proteostasi, alla regolazione del ciclo cellulare e alle vulnerabilità dipendenti dal contesto che derivano da una funzione ribosomiale perturbata.

Ribosomal Protein L22 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RPL22 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RPL22. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RPL22. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RPL22 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.