RGS17 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425225

Panoramica

Rgs17 codifica per il regolatore della segnalazione delle proteine G 17 (RGS17), un membro della famiglia RGS che accelera l’idrolisi del GTP sulle subunità Gα per terminare la segnalazione mediata dai GPCR. Attenuando l’attività delle proteine G eterotrimeriche, RGS17 influenza la segnalazione cAMP/PKA, le cascate di chinasi a valle e i programmi trascrizionali legati alla comunicazione neuronale e alle risposte delle cellule secretorie. Nei sistemi murini, un’alterata espressione di Rgs17 è stata associata a cambiamenti dei fenotipi neurocomportamentali e a reti di segnalazione deregolate comunemente studiate in modelli di biologia tumorale e metastasi. Queste caratteristiche rendono RGS17 un nodo utile per studiare l’ampiezza del segnale dei GPCR, il cross-talk tra vie di segnalazione e gli output trascrizionali dipendenti dal contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RGS17 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rgs17 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rgs17 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rgs17 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RGS17.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rgs17 per lo studio della segnalazione di RGS17, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rgs17 critici per la funzione di RGS17
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rgs17 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RGS17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RGS17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rgs17. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RGS17 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RGS17 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rgs17 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rgs17 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.