RFX2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406040

Panoramica

RFX2 (regulatory factor X2) è un fattore di trascrizione di tipo winged-helix che si lega ai motivi X-box e coordina programmi di espressione genica necessari per la ciliogenesi e la funzione delle ciglia motili. Nelle cellule umane, RFX2 regola reti che controllano l’ancoraggio del corpo basale, l’assemblaggio dell’assonema e il trasporto intraflagellare, collegandolo all’accoppiamento tra ciclo cellulare e ciglia e alla differenziazione epiteliale. La deregolazione dei circuiti trascrizionali della famiglia RFX è stata associata a difetti dello sviluppo correlati alle ciglia e a fenotipi riproduttivi compatibili con una biogenesi compromessa di ciglia motili e flagelli. In quanto regolatore trascrizionale a monte di numerosi geni ciliari strutturali e di trasporto, RFX2 è spesso studiato nei pathway che governano la clearance mucociliare, la determinazione sinistra-destra e l’espressione genica rilevante per la spermatogenesi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RFX2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RFX2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RFX2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RFX2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RFX2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RFX2 per lo studio della segnalazione di RFX2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RFX2 critici per la funzione di RFX2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RFX2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RFX2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RFX2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RFX2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RFX2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RFX2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RFX2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RFX2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.