RAPGEF6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403816

Panoramica

RAPGEF6 (noto anche come PDZ-GEF2) codifica un fattore di scambio di nucleotidi della guanina che attiva le GTPasi Rap1 e Rap2, collegando i segnali avviati dai recettori al ciclo delle piccole GTPasi e al reclutamento degli effettori a valle. Attraverso il controllo, dipendente da Rap, della segnalazione inside-out delle integrine, dell’adesione mediata dalle caderine e dell’organizzazione del citoscheletro, RAPGEF6 contribuisce alla regolazione della polarità cellulare, della migrazione e della stabilità delle giunzioni. I suoi domini PDZ e di associazione a Ras supportano interazioni di scaffold che coordinano la segnalazione a livello delle membrane e dei complessi di adesione. La disregolazione della segnalazione RapGEF/Rap è stata implicata in alterazioni dei fenotipi di adesione e motilità cellulare rilevanti per la biologia del cancro, i processi di neurosviluppo e il traffico delle cellule immunitarie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RAPGEF6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RAPGEF6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RAPGEF6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RAPGEF6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RAPGEF6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RAPGEF6 per lo studio della segnalazione di RAPGEF6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RAPGEF6 critici per la funzione di RAPGEF6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RAPGEF6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RAPGEF6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RAPGEF6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RAPGEF6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RAPGEF6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RAPGEF6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RAPGEF6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RAPGEF6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.