Ral BP-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402752

Panoramica

RALBP1 codifica Ral BP-1 (nota anche come RLIP76), un effettore multifunzionale di RalA/RalB che collega la segnalazione delle piccole GTPasi all’endocitosi, al rimodellamento del citoscheletro e al traffico di membrana. Ral BP-1 interagisce con componenti dell’internalizzazione dipendente dalla clatrina e con complessi adattatori, influenzando il turnover dei recettori e la dinamica delle vescicole, e contribuisce inoltre alle reti di risposta allo stress tramite il trasporto ATP-dipendente di coniugati del glutatione e metaboliti xenobiotici. Attraverso queste attività, RALBP1 influisce su processi quali la migrazione cellulare, la progressione del ciclo cellulare e la resistenza cellulare allo stress ossidativo ed elettrofilo. Un’espressione o una segnalazione deregolata di RALBP1 è stata riportata in molteplici contesti oncologici ed è spesso studiata in relazione a invasività, vie associate alla metastasi e tolleranza allo stress cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ral BP-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RALBP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RALBP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RALBP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ral BP-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RALBP1 per lo studio della segnalazione di Ral BP-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RALBP1 critici per la funzione di Ral BP-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RALBP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ral BP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Ral BP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RALBP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ral BP-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Ral BP-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RALBP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RALBP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.