Rad51D Plasmide Double Nickase (h): sc-408085-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rad51D Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rad51D Double Nickase Plasmid (h) e il Rad51D Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RAD51D. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rad51D Antibody (C-1): sc-398819
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rad51D Plasmide Double Nickase (h) | sc-408085-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rad51D Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408085-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAD51D codifica Rad51D, un paralogo di RAD51 che funziona all’interno del complesso BCDX2 per promuovere la ricombinazione omologa (HR) e il riavvio delle forche di replicazione bloccate. Rad51D supporta la riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA, contribuisce alla stabilità del genoma e interagisce con la rete dell’anemia di Fanconi/BRCA e con la segnalazione dei checkpoint durante le fasi S e G2. Difetti in RAD51D compromettono la capacità di HR, aumentano l’instabilità cromosomica e sono associati a una predisposizione ereditaria al cancro e alla tumorigenesi in molteplici contesti tissutali. Di conseguenza, RAD51D è ampiamente studiato nelle vie di risposta al danno del DNA, nei modelli di stress replicativo e nelle analisi struttura–funzione dei complessi mediatori della HR.
Rad51D Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RAD51D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RAD51D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RAD51D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RAD51D interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.