Rab 5A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-435445

Panoramica

Rab5a codifica la piccola GTPasi Rab5A, un regolatore centrale della dinamica degli endosomi precoci che coordina l’endocitosi mediata da clatrina, l’ancoraggio/fusione delle vescicole e la maturazione endosomiale tramite effettori quali EEA1 e nodi di segnalazione della PI3K. Controllando l’internalizzazione e il traffico dei recettori, Rab5A influenza l’ampiezza e la durata della segnalazione a valle di vie tra cui EGFR/MAPK e PI3K/AKT, e contribuisce al riciclo di membrana e allo smistamento del carico verso la degradazione lisosomiale. L’attività di Rab5A è inoltre collegata al rimodellamento del citoscheletro e alla crescita dei neuriti attraverso il cross-talk tra endosomi e actina. Un traffico endocitico deregolato che coinvolge Rab5a è stato implicato in difetti endosomiali associati alla neurodegenerazione, in un’alterata gestione dei recettori immunitari e in una segnalazione aberrante dei recettori per i fattori di crescita in modelli di malattie proliferative.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab 5A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rab5a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rab5a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rab5a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rab 5A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rab5a per lo studio della segnalazione di Rab 5A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rab5a critici per la funzione di Rab 5A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rab5a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rab 5A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Rab 5A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rab5a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rab 5A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Rab 5A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rab5a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rab5a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.