Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Rab 12 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-415015
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rab 12 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Rab 12, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rab 12 Antibody (H-11): sc-515613
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rab 12 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-415015 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
RAB12 codifica Rab12, una piccola GTPasi che regola il traffico di membrana all’interno del sistema endosomiale–lisosomiale. Rab12 contribuisce alla dinamica degli endosomi tardivi e dei lisosomi, influenzando lo smistamento del carico, il turnover dei recettori e le vie di degradazione associate all’autofagia. Modulando il traffico intracellulare e la proteostasi, Rab12 può incidere sulle risposte cellulari allo stato nutrizionale e sulle reti di segnalazione dello stress. Un trasporto dipendente dalle Rab GTPasi deregolato è stato associato ad alterazioni del metabolismo e a fenotipi invasivi, sostenendo l’interesse a studiare RAB12 in modelli cellulari rilevanti per la malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab 12 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RAB12 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RAB12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RAB12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rab 12.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RAB12 per lo studio della segnalazione di Rab 12, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni RAB12 critici per la funzione di Rab 12
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RAB12 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Rab 12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rab 12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RAB12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Rab 12 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rab 12 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RAB12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RAB12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.