Plásmido CRISPR de Activación (h) Rab 11A: sc-400617-ACT

RAB11A codifica la pequeña GTPasa Rab11A, un regulador central de la dinámica de los endosomas de reciclaje que coordina la gemación de vesículas, su transporte y su anclaje a la membrana plasmática. Rab11A controla la entrega polarizada de membrana, el reciclaje de receptores, la citocinesis y la formación del lumen epitelial mediante la interacción con proteínas que interactúan con la familia Rab11 (FIP) y el acoplamiento a motores basados en actina y microtúbulos. A través de estas funciones de tráfico, Rab11A influye en las salidas de señalización de receptores de superficie e integrinas y contribuye a decisiones de clasificación endocítica que moldean la migración y la polaridad celulares. La desregulación del reciclaje dependiente de Rab11A se ha asociado con fenotipos relevantes para la transformación oncogénica, procesos neurodegenerativos e interacciones huésped–patógeno en las que el tráfico de membranas y la compartimentación se ven alterados.

Rab 11A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAB11A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab 11A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAB11A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAB11A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab 11A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAB11A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab 11A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab 11A en células tumorales con expresión de RAB11A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.