QTRT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-413456-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- QTRT1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il QTRT1 Double Nickase Plasmid (h) e il QTRT1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira QTRT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: QTRT1 Antibody (D-7): sc-398918
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
QTRT1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-413456-NIC | 20 µg | $410.00 |
QTRT1 codifica la subunità catalitica della tRNA-guanina transglicosilasi, che inserisce la queuosina nella posizione wobble (G34) di specifici tRNA citosolici, modulando così la fedeltà di decodifica dei codoni e le dinamiche della traduzione. Attraverso questa via di modificazione dei tRNA, QTRT1 contribuisce alla proteostasi e all’adattamento cellulare allo stress influenzando l’accuratezza e l’efficienza della sintesi proteica. La disregolazione degli enzimi di modificazione dei tRNA, incluso QTRT1, è stata associata a programmi traduttivi alterati collegati a fenotipi di proliferazione e risposta allo stress, rendendo il gene rilevante per studi di biologia dell’RNA e regolazione metabolica. QTRT1 rappresenta quindi un bersaglio utile per indagini meccanicistiche su come le modifiche delle basi wobble influenzino l’espressione genica a livello della traduzione.
QTRT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus QTRT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di QTRT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di QTRT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con QTRT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.