PUMA Plasmide Double Nickase (m): sc-431320-NIC

Il gene murino **Bbc3** codifica **PUMA** (p53 upregulated modulator of apoptosis), un membro “BH3-only” della famiglia **BCL-2** che promuove la permeabilizzazione della membrana esterna mitocondriale neutralizzando le proteine anti-apoptotiche BCL-2 e consentendo l’attivazione di **BAX/BAK**. PUMA viene indotto rapidamente dallo stress cellulare e integra segnali provenienti dalle risposte al danno al DNA dipendenti da **p53**, dalla privazione di fattori di crescita e da altri stimoli apoptotici per innescare l’apoptosi intrinseca e l’attivazione delle caspasi. Attraverso queste vie, Bbc3/PUMA contribuisce a regolare l’omeostasi dei tessuti e l’eliminazione delle cellule danneggiate, e la sua disregolazione è spesso studiata in contesti di soppressione tumorale, neurodegenerazione e sopravvivenza delle cellule immunitarie. In quanto nodo centrale nelle reti dell’apoptosi e della risposta allo stress, PUMA è comunemente utilizzata per analizzare i meccanismi alla base delle decisioni sul destino cellulare e del controllo dei checkpoint nei modelli murini.

PUMA Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Bbc3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Bbc3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Bbc3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Bbc3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.