PSMD11 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410966-ACT

PSMD11 codifica una subunità regolatoria non ATPasica del cappuccio (lid) del proteasoma 26S, che supporta la degradazione proteica dipendente dall’ubiquitina e la proteostasi. Promuovendo un assemblaggio efficiente del proteasoma e una corretta processazione dei substrati, PSMD11 influenza il turnover dei regolatori del ciclo cellulare, dei fattori di trascrizione e delle proteine mal ripiegate, collegandosi così a vie come il controllo del ciclo cellulare, le risposte allo stress e la processazione dell’antigene. Un’alterazione dell’attività delle subunità regolatorie del proteasoma è stata associata a uno squilibrio dell’omeostasi proteica e a programmi di adattamento cellulare osservati in contesti rilevanti per il cancro e la neurodegenerazione. PSMD11 è quindi spesso studiato come modulatore della capacità del proteasoma e della resilienza allo stress proteotossico nelle cellule umane.

PSMD11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PSMD11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PSMD11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PSMD11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PSMD11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PSMD11. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PSMD11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PSMD11 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PSMD11 nelle cellule tumorali con espressione di PSMD11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.