PRRG1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-436837

Panoramica

Il gene murino Prrg1 codifica PRRG1, una proteina transmembrana ricca di prolina con un dominio γ-carbossiglutammato (Gla), che suggerisce un ruolo nelle interazioni proteiche calcio-dipendenti alla superficie cellulare. PRRG1 è implicata nella segnalazione associata all’adesione e in processi regolatori prossimali alla membrana che possono influenzare l’organizzazione del citoscheletro, il traffico dei recettori e la comunicazione tra la matrice extracellulare e le vie intracellulari. I pattern di espressione e le associazioni riportate collegano PRRG1 a programmi di differenziazione cellulare e all’omeostasi specifica dei tessuti, rendendola rilevante per studi su alterazioni della segnalazione in contesti di sviluppo e di malattia. L’analisi della funzione di PRRG1 può aiutare a chiarire come le proteine con dominio Gla modulino microambienti locali di segnalazione e le risposte trascrizionali a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRRG1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Prrg1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Prrg1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Prrg1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRRG1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Prrg1 per lo studio della segnalazione di PRRG1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Prrg1 critici per la funzione di PRRG1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Prrg1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRRG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PRRG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Prrg1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRRG1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PRRG1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Prrg1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Prrg1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.