PRODH Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403063-LAC

Il gene umano **PRODH** codifica la prolina deidrogenasi (prolina ossidasi), una flavoproteina della membrana interna mitocondriale che catalizza il primo passaggio del catabolismo della prolina, convertendo la prolina in **Δ1-pirrolina-5-carbossilato (P5C)** e trasferendo elettroni alla catena respiratoria. Attraverso la navetta redox prolina–P5C, PRODH mette in relazione il metabolismo degli amminoacidi con l’equilibrio redox cellulare, la funzione mitocondriale e l’omeostasi bioenergetica. Alterazioni dell’attività di PRODH sono state associate a perturbazioni nella segnalazione dello stress ossidativo e a rimodellamenti metabolici, con rilevanza per fenotipi neuropsichiatrici e programmi metabolici correlati al cancro. In quanto nodo di via che collega il metabolismo della prolina, la produzione di ROS e la respirazione mitocondriale, PRODH è spesso oggetto di studio nelle ricerche sull’adattamento allo stress e sulla regolazione metabolica.

Le particelle di attivazione lentivirale PRODH (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PRODH in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PRODH (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PRODH, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PRODH. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PRODH e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.