Partículas Lentivirales de Activación (h) PRODH: sc-403063-LAC

El gen humano **PRODH** codifica la **prolina deshidrogenasa** (prolina oxidasa), una flavoproteína de la membrana interna mitocondrial que cataliza el primer paso del catabolismo de la prolina, convirtiendo la prolina en **Δ1-pirrolina-5-carboxilato** y transfiriendo electrones a la cadena respiratoria. A través de la lanzadera redox prolina–P5C, PRODH conecta el metabolismo de aminoácidos con el equilibrio redox celular, la función mitocondrial y la homeostasis bioenergética. La alteración de la actividad de PRODH se ha asociado con perturbaciones en la señalización del estrés oxidativo y con una reprogramación metabólica, con relevancia para fenotipos neuropsiquiátricos y programas metabólicos relacionados con el cáncer. Como nodo de vía que enlaza el metabolismo de la prolina, la producción de ROS y la respiración mitocondrial, PRODH se examina con frecuencia en estudios de adaptación al estrés y regulación metabólica.

Las partículas de activación lentiviral PRODH (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PRODH en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PRODH (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PRODH, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PRODH. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PRODH y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.