PRMT6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403433-ACT

PRMT6 (protein arginine methyltransferase 6) è una PRMT nucleare di tipo I che catalizza la dimetilazione asimmetrica dei residui di arginina sugli istoni e su substrati non istonici, modulando così la struttura della cromatina e i programmi trascrizionali. Contribuisce alla regolazione epigenetica attraverso la metilazione dell’arginina dell’istone H3 e il cross-talk con altre modifiche post-traduzionali, influenzando la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e l’espressione genica associata alla differenziazione. L’attività di PRMT6 si interfaccia con vie che regolano la repressione/attivazione trascrizionale e con complessi di rimodellamento della cromatina, plasmando reti di regolazione genica specifiche del contesto. Un’espressione o un’attività deregolate di PRMT6 sono state riportate in molteplici contesti rilevanti per la malattia, a supporto della sua utilità come bersaglio per studi meccanicistici sul controllo epigenetico e sulla plasticità dell’espressione genica nelle cellule umane.

PRMT6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRMT6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRMT6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRMT6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRMT6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRMT6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRMT6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRMT6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRMT6 nelle cellule tumorali con espressione di PRMT6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.