PRH2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406292

Panoramica

PRH2 (proteina ricca in prolina, sottofamiglia HaeIII 2) codifica una proteina salivare secreta e ricca in prolina, espressa principalmente nelle ghiandole salivari e rilasciata nella cavità orale. Le proteine derivate da PRH2 contribuiscono alla composizione e alle proprietà fisico-chimiche della saliva, favorendo la lubrificazione, la formazione della pellicola acquisita dello smalto e le interazioni con i componenti della dieta e con il microbiota orale. La variabilità delle proteine salivari ricche in prolina è stata studiata nel contesto delle interazioni ospite–microbo, dell’ecologia orale e della suscettibilità a condizioni infiammatorie del cavo orale, in cui il legame proteina–superficie e l’adesione microbica possono influenzare i processi immunitari e di barriera locali. In quanto fattore secreto ad alta espressione in un contesto a distribuzione tissutale ristretta, PRH2 rappresenta un modello utile per analizzare la regolazione genica della secrezione e la funzione proteica nei sistemi epiteliali e ghiandolari orali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRH2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PRH2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PRH2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PRH2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRH2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PRH2 per lo studio della segnalazione di PRH2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PRH2 critici per la funzione di PRH2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PRH2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRH2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PRH2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PRH2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRH2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PRH2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PRH2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PRH2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.