Presenilin 1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401227-ACT

PSEN1 codifica la presenilina 1, il nucleo catalitico del complesso γ-secretasi, che media la proteolisi intramembrana di molteplici proteine di membrana di tipo I, inclusi i recettori NOTCH e la proteina precursore dell’amiloide (APP). Attraverso eventi di clivaggio regolati, la presenilina 1 influenza la segnalazione di Notch, le decisioni sul destino cellulare e il traffico proteico all’interno dei compartimenti endosomiali e lisosomiali. L’attività di PSEN1 incide anche sull’omeostasi del calcio e sulla funzione sinaptica tramite una modulazione dei percorsi di segnalazione neuronale dipendente dal processamento. La variabilità genetica e la disfunzione della γ-secretasi sono fortemente associate a meccanismi neurodegenerativi rilevanti per la biologia della malattia di Alzheimer, inclusa un’alterata produzione dei peptidi Aβ e le conseguenti risposte di stress cellulare a valle.

Presenilin 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PSEN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Presenilin 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PSEN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PSEN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Presenilin 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PSEN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Presenilin 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Presenilin 1 nelle cellule tumorali con espressione di PSEN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.