PRAMEF6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417298

Panoramica

PRAMEF6 (preferentially expressed antigen in melanoma family member 6) è una proteina della famiglia PRAME specifica dei primati, con un’espressione altamente ristretta nei tessuti normali e una frequente derepressione nei tumori, in linea con la biologia degli antigeni cancro/testicolo. Sebbene PRAMEF6 sia meno caratterizzato dal punto di vista funzionale rispetto a PRAME, le proteine della famiglia PRAME sono implicate nella regolazione trascrizionale ed epigenetica e sono state associate alla modulazione della segnalazione del recettore dell’acido retinoico e dei programmi di differenziamento cellulare. L’alterata espressione dei geni della famiglia PRAME è collegata alla proliferazione delle cellule tumorali, al riconoscimento immunitario e all’identità di linea, rendendo PRAMEF6 un marcatore utile e un bersaglio meccanicistico per lo studio di stati trascrizionali oncogenici. Le applicazioni di ricerca includono la profilazione delle reti di espressione genica dipendenti da PRAMEF6 e l’analisi dei meccanismi regolatori che ne consentono l’attivazione aberrante in contesti maligni.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRAMEF6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PRAMEF6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PRAMEF6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PRAMEF6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRAMEF6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PRAMEF6 per lo studio della segnalazione di PRAMEF6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PRAMEF6 critici per la funzione di PRAMEF6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PRAMEF6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRAMEF6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PRAMEF6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PRAMEF6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRAMEF6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PRAMEF6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PRAMEF6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PRAMEF6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.