PPPDE2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406172

Descripción general

PPPDE2 (también anotado como DESI1) codifica una proteína tipo proteasa/deubiquitinasa dependiente de cisteína, implicada en la regulación posraduccional de la estabilidad proteica y de la señalización. Entre las actividades descritas se incluyen la desSUMOilación o el procesamiento de modificadores tipo ubiquitina, lo que vincula a PPPDE2 con la proteostasis, las respuestas al estrés y el control dinámico de la función de proteínas nucleares y citosólicas. A través de estos mecanismos, PPPDE2 puede influir en vías que regulan la progresión del ciclo celular, la apoptosis y programas transcripcionales que dependen de la modificación reversible de proteínas. La expresión alterada o una desregulación del recambio de estos modificadores se ha asociado con fenotipos celulares relevantes para la biología del cáncer y procesos neurodegenerativos, lo que respalda su estudio en sistemas modelo pertinentes para enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PPPDE2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DESI1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DESI1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DESI1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PPPDE2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DESI1 para la investigación de la señalización de PPPDE2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DESI1 críticos para la función de PPPDE2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DESI1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PPPDE2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PPPDE2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DESI1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PPPDE2 (h) y el plásmido HDR PPPDE2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DESI1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DESI1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.