Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
PP1γ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-422379-KO-2
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PP1γ Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m2) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PP1γ, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PP1γ Antibody (E-4): sc-515943
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PP1γ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2) | sc-422379-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Ppp1cc codifica la proteina murina fosfatasi 1 gamma (PP1γ), una fosfatasi catalitica serina/treonina che controlla la segnalazione dipendente dalla fosforilazione defosforilando diversi substrati nel nucleo e nel citoplasma. PP1γ funziona all’interno di oloenzimi multiproteici che ne indirizzano la specificità verso processi tra cui la progressione del ciclo cellulare, la dinamica della cromatina, l’elaborazione dell’RNA e il rimodellamento del citoscheletro. Attraverso queste vie, PP1γ contribuisce alla regolazione dell’uscita dalla mitosi, delle risposte al danno al DNA e dei programmi di differenziamento cellulare. Una segnalazione deregolata della famiglia PP1 e un’omeostasi della fosforilazione alterata sono collegate a meccanismi rilevanti per i disturbi proliferativi, l’instabilità genomica e la neurobiologia, supportandone l’utilizzo in studi funzionali mirati alle vie di segnalazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PP1γ (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppp1cc in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppp1cc insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppp1cc a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PP1γ.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppp1cc per lo studio della segnalazione di PP1γ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ppp1cc critici per la funzione di PP1γ
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppp1cc per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PP1γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PP1γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppp1cc. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PP1γ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PP1γ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppp1cc per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppp1cc definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.