POPX2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406536

Panoramica

PPM1F codifica la fosfatasi proteica serina/treonina POPX2 (famiglia PP2C), un regolatore della segnalazione dipendente dalla fosforilazione che controbilancia le vie chinasi che controllano la dinamica del citoscheletro e i processi associati al ciclo cellulare. POPX2 è stata collegata alla modulazione del rimodellamento dell’actina e della motilità cellulare attraverso la defosforilazione di specifici substrati all’interno di reti accoppiate alle GTPasi Rho e sensibili allo stress, integrando segnali che influenzano l’adesione e la migrazione direzionale. Modulando questi nodi di segnalazione, POPX2 può plasmare risposte cellulari quali proliferazione, sopravvivenza e comportamento invasivo in sistemi modello. Un’attività fosfatasica deregolata e un’alterata espressione di PPM1F/POPX2 sono state riportate in contesti rilevanti per la biologia del cancro e per altri disturbi in cui una segnalazione di fosforilazione aberrante compromette l’omeostasi dei tessuti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO POPX2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PPM1F in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PPM1F insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PPM1F a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina POPX2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PPM1F per lo studio della segnalazione di POPX2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PPM1F critici per la funzione di POPX2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PPM1F per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal POPX2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal POPX2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PPM1F. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal POPX2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR POPX2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PPM1F per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PPM1F definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.