Pol I/II/III RPB8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406520

Descripción general

POLR2H codifica RPB8, una subunidad pequeña y conservada compartida por las ARN polimerasas I, II y III, que contribuye al ensamblaje de la polimerasa, su estabilidad y su competencia transcripcional. A través de su participación en la síntesis de ARNr (Pol I), la transcripción de ARNm (Pol II) y la producción de ARNt/ARNr 5S (Pol III), RPB8 sostiene programas centrales de expresión génica que acoplan la transcripción con la biogénesis ribosomal, el control del ciclo celular y la proteostasis. La actividad alterada de la maquinaria basal de transcripción y de las vías de estrés nucleolar puede remodelar la salida global de transcritos y la señalización posterior, lo que convierte a POLR2H en un nodo útil para estudiar vulnerabilidades transcripcionales y la reconfiguración de la expresión a escala genómica en contextos relevantes para la enfermedad. Su función esencial en múltiples polimerasas también ofrece un punto de apoyo mecanístico para investigar cómo los factores generales de transcripción y los estados de la cromatina se coordinan entre sistemas de polimerasa.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Pol I/II/III RPB8 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen POLR2H en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del POLR2H junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de POLR2H tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Pol I/II/III RPB8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en POLR2H para la investigación de la señalización de Pol I/II/III RPB8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de POLR2H críticos para la función de Pol I/II/III RPB8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de POLR2H para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Pol I/II/III RPB8 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Pol I/II/III RPB8 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus POLR2H. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Pol I/II/III RPB8 (h) y el plásmido HDR Pol I/II/III RPB8 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología POLR2H para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana POLR2H definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.