Pol I/II/III RPB8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406520

Panoramica

POLR2H codifica RPB8, una piccola subunità conservata condivisa dalle RNA polimerasi I, II e III, che contribuisce all’assemblaggio della polimerasi, alla sua stabilità e alla competenza trascrizionale. Attraverso la sua partecipazione alla sintesi di rRNA (Pol I), alla trascrizione di mRNA (Pol II) e alla produzione di tRNA/5S rRNA (Pol III), RPB8 sostiene programmi fondamentali di espressione genica che collegano la trascrizione alla biogenesi dei ribosomi, al controllo del ciclo cellulare e alla proteostasi. Un’alterata attività del macchinario trascrizionale basale e delle vie di stress nucleolare può rimodellare l’output trascrizionale globale e la segnalazione a valle, rendendo POLR2H un nodo utile per studiare vulnerabilità trascrizionali e il ricollegamento su scala genomica dei programmi di espressione in contesti rilevanti per la malattia. Il suo ruolo essenziale e condiviso tra più polimerasi offre inoltre un punto di appoggio meccanicistico per indagare come i fattori generali di trascrizione e gli stati della cromatina si coordinino tra i diversi sistemi di polimerasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pol I/II/III RPB8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene POLR2H in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del POLR2H insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto POLR2H a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pol I/II/III RPB8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di POLR2H per lo studio della segnalazione di Pol I/II/III RPB8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni POLR2H critici per la funzione di Pol I/II/III RPB8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di POLR2H per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Pol I/II/III RPB8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Pol I/II/III RPB8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus POLR2H. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Pol I/II/III RPB8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Pol I/II/III RPB8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia POLR2H per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio POLR2H definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.