PMPCA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406691

Descripción general

PMPCA codifica la subunidad alfa de la peptidasa de procesamiento mitocondrial (MPP), una metaloproteasa heterodimérica que escinde las presecuencias N‑terminales de direccionamiento mitocondrial de proteínas codificadas en el núcleo después de su importación a la matriz mitocondrial. Mediante este paso de maduración, PMPCA favorece el ensamblaje y la función de los complejos de fosforilación oxidativa, la proteostasis mitocondrial y programas más amplios del metabolismo energético vinculados a la biogénesis mitocondrial. La alteración de la actividad de PMPCA puede perjudicar la maduración de proteínas mitocondriales, modificar el rendimiento de la cadena respiratoria y desencadenar respuestas de estrés celular que convergen con la apoptosis y la reprogramación metabólica. Se han asociado variantes en PMPCA con trastornos mitocondriales que presentan fenotipos de neurodesarrollo y neurodegeneración, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la disfunción mitocondrial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PMPCA (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PMPCA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PMPCA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PMPCA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PMPCA.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PMPCA para la investigación de la señalización de PMPCA, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PMPCA críticos para la función de PMPCA
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PMPCA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PMPCA CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PMPCA CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PMPCA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PMPCA (h) y el plásmido HDR PMPCA (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PMPCA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PMPCA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.