PMPCA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406691

Panoramica

PMPCA codifica la subunità alfa della peptidasi di processamento mitocondriale (MPP), una metalloproteasi eterodimerica che rimuove le preseque nze di targeting mitocondriale all’estremità N-terminale dalle proteine codificate dal nucleo dopo la loro importazione nella matrice mitocondriale. Attraverso questo passaggio di maturazione, PMPCA supporta l’assemblaggio e la funzione dei complessi della fosforilazione ossidativa, la proteostasi mitocondriale e programmi più ampi del metabolismo energetico legati alla biogenesi mitocondriale. L’alterazione dell’attività di PMPCA può compromettere la maturazione delle proteine mitocondriali, modificare le prestazioni della catena respiratoria e innescare risposte di stress cellulare che si intersecano con l’apoptosi e la riprogrammazione metabolica. Varianti in PMPCA sono state associate a patologie mitocondriali con fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi, rendendolo rilevante per studi meccanicistici della disfunzione mitocondriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PMPCA (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PMPCA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PMPCA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PMPCA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PMPCA.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PMPCA per lo studio della segnalazione di PMPCA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PMPCA critici per la funzione di PMPCA
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PMPCA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PMPCA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PMPCA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PMPCA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PMPCA Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PMPCA (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PMPCA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PMPCA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.