Plásmido CRISPR de Activación (h) plasminogen: sc-401410-ACT

El gen humano **PLG** codifica el plasminógeno, un cimógeno producido en el hígado que se convierte en plasmina para impulsar la fibrinólisis y una amplia proteólisis extracelular. Mediante interacciones con los activadores del plasminógeno de tipo tisular y de tipo uroquinasa, así como con inhibidores de la plasmina, el plasminógeno regula la resolución de coágulos, la remodelación de la matriz extracelular y la migración celular, conectándose con la reparación de heridas y con redes inflamatorias de proteasas. La actividad de la plasmina también influye en la proteólisis pericelular y en la biodisponibilidad de factores de crecimiento, lo que vincula a **PLG** con la homeostasis vascular y las vías de remodelación tisular. Las alteraciones en la función o la regulación del plasminógeno se asocian con una depuración desregulada de la fibrina y con desequilibrios de proteasas en contextos de enfermedades trombóticas e inflamatorias, lo que respalda estudios mecanísticos en hemostasia y biología de la matriz.

plasminogen El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PLG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

plasminogen El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PLG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PLG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de plasminogen. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PLG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de plasminogen en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía plasminogen en células tumorales con expresión de PLG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.