plasminogen Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401410-ACT

Il gene umano **PLG** codifica il plasminogeno, uno zimogeno di origine epatica che viene convertito in plasmina, promuovendo la fibrinolisi e un’ampia proteolisi extracellulare. Attraverso interazioni con gli attivatori del plasminogeno di tipo tissutale e urochinasi e con gli inibitori della plasmina, il plasminogeno regola la risoluzione dei coaguli, il rimodellamento della matrice extracellulare e la migrazione cellulare, intersecandosi con la riparazione delle ferite e con le reti di proteasi infiammatorie. L’attività della plasmina influenza anche la proteolisi pericellulare e la biodisponibilità dei fattori di crescita, collegando **PLG** all’omeostasi vascolare e alle vie di rimodellamento tissutale. Alterazioni della funzione o della regolazione del plasminogeno sono associate a una clearance della fibrina disfunzionale e a uno squilibrio delle proteasi in contesti di malattie trombotiche e infiammatorie, a supporto di studi meccanicistici nell’emostasi e nella biologia della matrice.

plasminogen Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PLG senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

plasminogen Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PLG nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PLG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di plasminogen. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PLG nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da plasminogen nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via plasminogen nelle cellule tumorali con espressione di PLG silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.