plasminogen Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401410-ACT

O gene humano PLG codifica o plasminogénio, um zimogénio de origem hepática que é convertido em plasmina para promover a fibrinólise e uma ampla proteólise extracelular. Por meio de interações com ativadores do plasminogénio do tipo tecidual e do tipo uroquinase, bem como com inibidores da plasmina, o plasminogénio regula a resolução de coágulos, a remodelação da matriz extracelular e a migração celular, intersectando-se com a reparação de feridas e redes inflamatórias de proteases. A atividade da plasmina também influencia a proteólise pericelular e a biodisponibilidade de fatores de crescimento, ligando o PLG à homeostase vascular e a vias de remodelação tecidular. Alterações na função ou na regulação do plasminogénio estão associadas a uma depuração desregulada de fibrina e a um desequilíbrio de proteases em contextos de doenças trombóticas e inflamatórias, sustentando estudos mecanísticos em hemostase e biologia da matriz.

plasminogen O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

plasminogen O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de plasminogen. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de plasminogen no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via plasminogen em células tumorais com expressão de PLG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.