Pim-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402784-ACT

PIM3 codifica per Pim-3, una chinasi serina/treonina costitutivamente attiva appartenente alla famiglia PIM, che integra segnali di citochine e fattori di crescita per regolare la progressione del ciclo cellulare, i segnali di sopravvivenza e il metabolismo cellulare. Pim-3 modula il controllo fosforilazione-dipendente dei programmi apoptotici e proliferativi, intersecando vie quali JAK/STAT e le reti associate a PI3K/AKT che influenzano l’output trascrizionale e traslazionale. Un’espressione aberrante di PIM3 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è spesso analizzata insieme a parametri della risposta allo stress e dell’integrità mitocondriale. Nei modelli di immunologia e biologia del cancro, Pim-3 viene utilizzata per studiare la plasticità della segnalazione guidata da chinasi, l’equilibrio proliferazione–apoptosi e il crosstalk tra vie che sostiene fenotipi adattativi.

Pim-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PIM3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Pim-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PIM3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PIM3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Pim-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PIM3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Pim-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Pim-3 nelle cellule tumorali con espressione di PIM3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.