PHLPPL Plasmide Double Nickase (m): sc-434083-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PHLPPL Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PHLPPL Double Nickase Plasmid (m) e il PHLPPL Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Phlpp2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PHLPPL Plasmide Double Nickase (m) | sc-434083-NIC | 20 µg | $410.00 |
Phlpp2 codifica PHLPPL, una fosfatasi proteica Ser/Thr che defosforila nodi chiave della segnalazione, incluso AKT, modulando così l’ampiezza della via PI3K–AKT, la sopravvivenza cellulare e l’omeostasi metabolica nelle cellule murine. Controbilanciando la fosforilazione guidata dalle chinasi, PHLPPL influenza la proliferazione, le risposte allo stress e gli output di segnalazione legati all’insulina, e può plasmare i programmi trascrizionali a valle regolati da mTOR e FOXO. Un’alterata attività della famiglia PHLPP è associata a fenotipi di crescita e metabolici deregolati in modelli sperimentali, rendendo Phlpp2 un bersaglio utile per studiare il rimodellamento delle vie di segnalazione in contesti di stress oncogenico o metabolico.
PHLPPL Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Phlpp2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Phlpp2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Phlpp2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Phlpp2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.