PGK1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401288-ACT

Il gene umano **PGK1** codifica la **fosfoglicerato chinasi 1**, un enzima chiave della glicolisi che catalizza la conversione di **1,3-bisfosfoglicerato** in **3-fosfoglicerato**, generando **ATP**. Grazie alla sua posizione centrale nel metabolismo del glucosio, PGK1 influenza la bioenergetica cellulare, l’equilibrio redox e l’adattamento metabolico in condizioni di ipossia, integrandosi con vie come la glicolisi/gluconeogenesi e i programmi trascrizionali regolati da **HIF**. Alterazioni dell’espressione e dell’attività di PGK1 sono state associate alla riprogrammazione metabolica in stati proliferativi e alla **deficienza ereditaria di PGK1**, che può interessare i tessuti con elevata richiesta energetica. In quanto locus di espressione costitutiva comunemente usato in biologia molecolare e nodo del metabolismo energetico, PGK1 rappresenta un bersaglio utile per studiare il flusso metabolico e la regolazione genica.

PGK1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PGK1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PGK1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PGK1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PGK1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PGK1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PGK1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PGK1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PGK1 nelle cellule tumorali con espressione di PGK1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.