Peroxin 3 Plasmide Double Nickase (h): sc-405639-NIC

PEX3 codifica la perossina 3, una proteina di membrana essenziale che avvia la biogenesi dei perossisomi reclutando perossine citosoliche e consentendo l’inserimento delle proteine della membrana perossisomiale nell’organello in formazione. Grazie al suo ruolo nell’assemblaggio dei perossisomi, PEX3 sostiene vie metaboliche lipidiche tra cui la β‑ossidazione degli acidi grassi a catena molto lunga, la biosintesi dei plasmalogeni e l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno. L’alterazione di PEX3 compromette la formazione dei perossisomi e perturba l’equilibrio redox cellulare e la composizione lipidica delle membrane, processi centrali per l’adattamento metabolico in molti tipi cellulari. Varianti patogene con perdita di funzione in PEX3 sono associate a disturbi della biogenesi dei perossisomi nello spettro di Zellweger, evidenziandone la rilevanza per lo studio dei meccanismi delle malattie metaboliche ereditarie.

Peroxin 3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PEX3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PEX3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PEX3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PEX3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.