Perilipin Plasmide Double Nickase (m): sc-430499-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Perilipin Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Perilipin Double Nickase Plasmid (m) e il Perilipin Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Plin1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Perilipin Plasmide Double Nickase (m) | sc-430499-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Perilipin Plasmide Double Nickase (m2) | sc-430499-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Plin1** codifica la **perilipina**, una proteina impalcatura associata alle goccioline lipidiche che regola l’immagazzinamento dei trigliceridi negli adipociti controllando l’accesso delle lipasi citosoliche alla superficie della gocciolina. La perilipina integra i segnali di fosforilazione mediati da PKA per coordinare l’attività di ATGL e della lipasi ormono-sensibile durante la lipolisi, collegando così la segnalazione del cAMP alla mobilizzazione degli acidi grassi e all’omeostasi energetica. Un’alterata espressione o funzione di Plin1 perturba la dinamica delle goccioline lipidiche e il metabolismo del tessuto adiposo, rendendolo rilevante per studi su obesità, insulino-resistenza, steatosi epatica e infiammazione legata a una gestione disfunzionale dei lipidi. Oltre che negli adipociti, il rimodellamento delle goccioline lipidiche dipendente da Plin1 viene utilizzato per indagare il crosstalk tra organelli, incluse le interazioni tra RE (reticolo endoplasmatico) e goccioline lipidiche e le risposte allo stress ossidativo.
Perilipin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Plin1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Plin1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Plin1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Plin1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.