periaxin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404868-ACT

PRX codifica per la periaxina, una proteina arricchita nelle cellule di Schwann che funge da impalcatura per il citoplasma abassonale e sostiene la stabilità della guaina mielinica nel sistema nervoso periferico. La periaxina partecipa all’organizzazione del citoscheletro e a complessi associati alla membrana che contribuiscono a mantenere l’architettura internodale, incluse interazioni con strutture associate a distroglicano e laminina. Attraverso questi ruoli strutturali, PRX contribuisce alla comunicazione assone–glia, al mantenimento della mielina e alla conduzione nei nervi periferici. L’alterazione della funzione di PRX è associata a neuropatie periferiche ereditarie caratterizzate da demielinizzazione e compromissione della fisiologia nervosa, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla biologia della mielina.

periaxin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRX senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

periaxin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRX nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRX, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di periaxin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRX nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da periaxin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via periaxin nelle cellule tumorali con espressione di PRX silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.